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Ori Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit (Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒)

规格:
20T 50T 100T

市场价:¥ 390.00

销售价:¥ 390.00

货号:CB102-20T

货期:现货

本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。

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产品介绍

    Ori Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit(Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒)提供了一种快速、方便的检测细胞凋亡的方法,可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸(PS)有高度亲和力,在正常生理条件下,PS主要位于质膜的内叶。在启动细胞凋亡时,PS被转移到细胞外膜上。PS一旦到达膜外,即可被Annexin V-FITC结合,从而检测出细胞的凋亡。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可与双链DNA特异性结合,并产生强烈的荧光,正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,PI可进入细胞内对DNA进行染色,与Annexin V搭配使用,可区分处于不同凋亡时期的细胞。

 

储存条件

4℃避光保存

 

数据展示

用PLK抑制剂(VolasertibBI6727)诱导A549细胞(人非小细胞肺癌细胞)凋亡,诱导浓度分别为0μM(A)、0.1 μM(B)、0.25 μM(C)、0.5 μM(D),分别诱导24 h后,根据说明书实验方案进行染色,用流式细胞仪检测结果如下图。因药物诱导细胞凋亡时间过长,图A中的晚凋细胞也较多。随着药物浓度的增加,凋亡细胞明显增加,说明Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒的分离效果佳。

 

注意事项

1. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

2. 被Annexin V染色的细胞不能用多聚甲醛或甲醇等试剂固定或透化;不能有破坏细胞膜的操作,因为这可能会产生假阳性。

3. 胰酶消化后,可在培养基中于最佳培养条件下恢复约30 min后染色,避免假阳性。

4. 在样品采集前加入PI,因为长时间与PI孵育可能会导致假阳性结果。

5. 由于检测细胞种类、诱导剂类型、仪器型号的差异,可选择设置加入不同的Annexin V-FITC用量(如:1.5 μl、3 μl、6 μl),通过流式分析获取检测时Annexin V-FITC的最佳用量,以取得更好的实验结果。

6. 染色后需尽快检测,时间过长会导致凋亡和坏死的细胞增加。

7. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,不适合此方法检测。

8. 血液样品须去除血小板。因为血小板含有PS,与Annexin V结合,干扰实验结果。可使用含EDTA的缓冲剂并离心洗去血小板。

9. 1×Annexin V Binding Buffer的瓶盖要紧闭,防止空气中的CO2进入后形成碳酸钙沉淀,减少游离Ca2+, 导致实验失败。

10. PI染料有毒,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

11. 试剂在使用前可短暂离心,防止溶液粘在管壁。

说明书

FAQ

Q1:流式细胞仪检测细胞凋亡,贴壁细胞有无更好的消化方式?

a. 检测消化时间不易控制的贴壁细胞,建议用对细胞损伤小且不会影响细胞膜上PS分布的Accutase细胞消化液。

 

Q2:是否可以用PBS代替凋亡试剂盒里面的Annexin V Binding Buffer?

a. 不可以,Annexin V与PS的结合依赖Ca2+,Annexin V Binding Buffer含有Ca2+,能促进Annexin V与PS的结合。不加Annexin V Binding Buffer,会导致Annexin V的结合能力降低,造成阳性信号下降甚至无阳性信号。

 

Q3: 没有检测到Annexin V-FITC信号?

a. 可能细胞没有凋亡,没有PS外翻,可用显微镜观察,验证细胞的形态;也可能是Annexin V Binding Buffer的pH降低,检查结合液的pH,确保其pH >5,最佳pH=7.2。

文献引用