Oriscience First Strand cDNA Synthesis Kit cDNA 第一链合成试剂盒，用于从mRNA或总RNA 模板中高效合成cDNA第一链。该试剂盒使用经基因改造的Oriscript逆转录酶，与AMV逆转录酶相比，其RNase H活性较低。该酶在42-50 °C下保持活性，适用于长达13 kb的cDNA链合成。

本试剂盒提供两种 cDNA 合成引物：Random Primer 和 Oligo (dT)18 Primer，用户可根据需要，灵活选择逆转录引物进行后续实验，使用本试剂盒合成的cDNA，可以直接用于后续的常规PCR、qPCR、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建等。

储存条件

试剂盒的所有组分都应储存在 -20 °C 。

Q1：低产量或无 RT-PCR 产物

a. 模板RNA降解：

RNA 纯度和完整性对于合成全长 cDNA 至关重要，在 cDNA 合成之前，请务必评估 RNA 的完整性。

b. 模板纯度低：

RNA提取过程中某些试剂残留会影响cDNA的合成如：SDS、EDTA、胍盐、磷酸盐、焦磷酸盐、多胺、亚精胺。要去除痕量污染物，请用乙醇重新沉淀 RNA并用 75 % 乙醇洗涤沉淀；

c. 模板数量不足

将模板量增加到建议的水平，在抽提获得总RNA后，在进行一些精细的定量检测时通常会进行DNase I消化，以充分去除可能的残留的DNA的干扰。DNase I进行热失活时，需要加入EDTA至终浓度为2.5mM，否则RNA在没有螯合剂的情况下，在加热过程中容易被水解，从而导致模板量不足。此外，扩增特定基因时，需要先查询该基因的组织分布特点，利用其高表达的组织进行目的基因的反转录和克隆。用该基因丰度极低的组织或细胞样品进行反转录和PCR扩增，通常会由于模板量过少而PCR扩增失败。

d. 选择正确的引物

对于细菌RNA和不含poly(A)尾巴的RNA，要用试剂盒中的random primer引物代替Oligo(dT)18引物。使用基因特异性反转录引物时，需要确保基因特异性引物设计合理正确。

e. 模板富含GC

    如果RNA模板富含GC或容易形成二级结构，请提高逆转录反应的温度,最高为45 °C。