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Oriscience Ultrasensitive ECL Kit (超敏ECL化学发光试剂盒)

规格:
120ml (A/B液各60ml) 500ml (A/B液各250ml)

市场价:¥ 260.00

销售价:¥ 260.00

货号:PD202-120 ml

货期:现货

本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。

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产品介绍 说明书 FAQ 文献引用 相关产品

产品介绍

Oriscience Ultrasensitive ECL Kit 是一种超敏型ECL化学发光试剂盒。本试剂盒以化学发光方法检测蛋白质,蛋白质经电泳、转膜、封闭后,分别用目标蛋白特异性一抗和偶联了辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)的二抗结合印迹膜上的目标蛋白,ECL随后与HRP发生反应,发出荧光。 Oriscience Ultrasensitive ECL试剂盒对化学发光底物和增强剂进行了优化,具有灵敏度高,稳定性好等特点,且试剂中不含有毒成分,实验安全性更高。

 

储存条件

4℃避光保存

 

注意事项

1. 在配置ECL工作液过程中吸取A液和B液时应避免交叉污染。

2. ECL工作液应在每次使用前新鲜配制,避免室温放置时间过长。

3. 曝光时间过长或蛋白过量,将会导致过曝,使条带强弱变化失去线性关系;曝光不足则条带模糊。

4. ECL发光液是HRP的显色底物,因此检测对象必须由HRP标记。

5. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。

说明书

FAQ

Q1:背景脏,信噪比低,出现非特异性条带

a. 抗体特异性低:选用特异性更高的抗体。

b. 显影时间过长:在确保获得足够强度的目标蛋白信号的前提下,缩短显影时间。

c. 抗体孵育和洗膜过程中的污染:确保操作过程中所有试剂和用具的洁净度。

d. 未进行非特异性封闭或封闭不充分:延长封闭时间,考虑更换合适的封闭剂。

e. 一抗浓度过高导致非特异性结合:稀释抗体至合适浓度,以更高稀释度抗体孵育更长时间(耗时长但特异性结合最好)。

f. 二抗与封闭剂非特异性结合:设置二抗对照(不加一抗)以明确,如确实存在此种情况,可在孵育和洗涤液中加入温和去污剂,如吐温20

OriNote:脱脂奶粉含有酪蛋白,对于酪蛋白激酶,该蛋白本身就是一种磷酸化蛋白底物,有可能会结合磷酸化特异性抗体而易产生高背景。使用 BSA 代替奶粉作为封闭剂。

g. 膜干燥,导致高背景: 在孵育过程中防止膜变干,在任何步骤都保证膜有充分的反应液。

h. 未结合蛋白质洗涤不充分:增加洗涤次数。

 

Q2:目的条带过曝

a. 减少蛋白上样量。

b. 缩短曝光时间。

c. 用缓冲液适当洗涤后重新显影。

d. 滴加ECL后放置一段时间再显影。

 

Q3:目的条带弱

a. 转膜不充分:优化转膜条件,提高转膜效率。

b. 增加蛋白上样量。

c. 抗体稀释倍数过大:降低抗体稀释倍数以提高其浓度。

d. 抗体使用时间过长导致抗体失效:重新配制抗体。

 

Q4:背景有不均匀的白色斑点

a. 转膜时膜上有气泡或抗体在膜上分布不均:转膜过程中尽量去除气泡,抗体孵育时保持摇动。

 

Q5:背景有黑色斑点

a. 抗体结合了封闭剂:过滤封闭剂。

文献引用

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