Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸(PS)有高度亲和力,在正常生理条件下,PS主要位于质膜的内叶。在启动细胞凋亡时,PS被转移到细胞外膜上。PS一旦到达膜外,即可被Annexin V-FITC结合,从而检测出细胞的凋亡。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可与双链DNA特异性结合,并产生强烈的荧光,正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,PI可进入细胞内对DNA进行染色,PI与Annexin V搭配使用,通过流式细胞术检测细胞中Annexin V和核酸染料的荧光强度,可区分活细胞(Annexin V-/核酸染料-)、早期凋亡细胞(Annexin V+/核酸染料-) 与中晚期凋亡细胞(或坏死细胞)(Annexin V+/核酸染料+)。
储存条件
4℃避光保存
使用本试剂时,需自备1xPBS,1×结合缓冲液 (1×Annexin V Binding Buffer),碘化丙锭溶液(PI);
实验设计建议:
(1)空白对照:不经药物处理的细胞,不加染料。
(2)阴性对照:不经药物处理的细胞,加入Annexin V-FITC和PI。
(3)阳性对照:诱导凋亡的细胞,加入Annexin V-FITC和PI。
(4)补偿: 诱导凋亡的细胞, 只用Annexin V-FITC染色;
诱导凋亡的细胞, 只用PI染色。